Nel Nuovo Testamento, giovane missionario collega di Paolo durante il suo ministero (Atti 16:1–3; 2 Tim. 1:1–5), figlio di padre greco e di madre giudea. Egli e i suoi genitori vivevano a Listra.

Paolo lo definisce suo «vero figliuolo in fede» (1 Tim. 1:2, 18; 2 Tim. 1:2). Timoteo era forse l'assistente più fidato e capace di Paolo (Fil. 2:19–23).